Tinciones que realizará para la evaluación de morfología microscópica.

Hacer una tinción de Gram de cultivos de 16 a 24 h. Todas las especies de Listeria son bacilos cortos Gram positivo; sin embargo en cultivos viejos pueden presentarse como formas cocoides. En extensiones delgadas se observan de color pálido y pueden confundirse con Bacteroides spp.

Cuadro 7. Material a utilizar para la tinción.

Material.	Cantidad.
Porta objetos	1
Cubre objetos	1
Frasco cristal violeta	2 gotas
Frasco solución lugol	2 gotas
Frasco solución alcohol-cetona	2 gotas
Frasco solución safranina	2 gotas
Piseta de agua destilada	1

Preparacion del frotis.

Cultivo liquido.

*Tomar un porta objetos y limpiarlo con una torunda de algodón con alcohol.

*Secar el porta objetos y etiquietar en un extremo.

*Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo.

*Dejar enfrial el mechero, para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos.

*Cercar al mechero el cultivo quitarle el tapón y flamear rápidamente la boca del mismo. Introducir el asa en el medio de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra.

*Extender la muestra sobre el portaobjetos con ayuda del asa de siembra.

*Dejar secar al aire.

Tinción diferencial Gram.

*Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto.

*Lavar cuidadosamente el frotis con agua destilada para eliminar el exeso de colorante.

*Sacudir un poco y sin dejar secar cubrir el frotis con dos gotas de lugol por 30 segundos.

*Lavar el frotis con agua destilada.

*Inclinar el porta objetos y aplicar gota a gota el colorante dejando que se escurra hasta que no fluya más tintura.

*Lavar con agua.

*Aplicar dos gotas de safranina durante 30 segundos.

*Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel y dejar secar al aire.

*Observar al microscopio con seco debil, seco fuerte e inmersión. 

Fuente: Manual de Prácticas de Microbilogia. Instituto Politécnico Nacional.

NOM-110-SSA1-1994                                                                                                                  pag. 10